REGULAMENTOS TÉCNICOS PARA

FIXAÇÃO DE IDENTIDADE E QUALIDADE DE PRÓPOLIS

1 – ALCANCE:

 1.1 – OBJETIVO: Estabelecer a identidade e os requisitos mínimos de qualidade a que deve atender a Própolis.

 1.2 – ÂMBITO DE APLICAÇÃO: O presente Regulamento refere-se à Própolis destinada ao comércio nacional ou internacional.

 2 – DESCRIÇÃO:

 2.1 – Definição: Entende-se por Própolis o produto oriundo de substâncias resinosas, gomosas e balsâmicas, coletadas pelas abelhas, de brotos, flores e exudatos de plantas. As abelhas acrescentam secreções salivares, cera e pólen para a elaboração final da Própolis.

 2.2 – Classificação – Quanto ao teor de flavonóides a Própolis será classificada em:

 2.2.1 – Baixo teor: até 1,0 % (m/m)

 2.2.2 – Médio teor: > 1,0 – 2,0 % (m/m)

 2.2.3 – Alto teor: > 2,0 % (m/m)

 2.3 – Designação (denominação de venda): Própolis

 3 – REFERÊNCIAS:

 3.1 – AOAC. Official Methods of Analysis of the Association of Analitical Chemists.Arlington, AOAC

 3.2 – Normas Analíticas do Instituto Adolfo Lutz

 3.3 – I.C.M.S.F.

 3.4 – Codex Alimentarius CAC/VOL A 1985

 4 – COMPOSIÇÕES E REQUISITOS:

 4.1 – Composição: A Própolis compõe-se de resinas e produtos balsâmicos, cera, óleos essenciais, pólen e micro elementos.

 4.2 – Requisitos:

 4.2.1 – Características Sensoriais:
 

• Aroma: característico (balsâmico e resinoso) dependendo da origem botânica.
• Cor: amarelada, parda, esverdeada, marrom e outras, variando conforme a origem botânica.
• Sabor: de suave balsâmico a forte e picante, dependendo da origem botânica.
• Consistência (à temperatura ambiente): maleável e rígida, dependendo da origem botânica.
• Granulometria: heterogênea.

 4.2.2 – Requisitos físico-químicos:
 

• Umidade: máximo de 8%
• Cinzas: máximo de 5%
• Ceras: máximo de 25 %
• Massa mecânica: máximo de 40%
• Compostos fenólicos: mínimo de 5% (m/m)
• Solúveis em etanol: mínimo de 35% (m/m)
• Flavonóides: mínimo de 0,5 % (m/m)
• Índice de oxidação: máximo de 22 segundos

  

 5 – ADITIVOS

 Proibe-se expressamente a utilização de qualquer tipo de aditivos.

 6 – CONTAMINANTES

 Os contaminantes orgânicos e inorgânicos não devem estar presentes em quantidades superiores ao limites estabelecidos pelo Regulamento específico.

7 – HIGIENE

 7.1 – Considerações gerais

 8 - CONTROLE DE QUALIDADE

 Análise Organoléptica:
 

• Aspecto e cor: Pó ou pedaços heterogêneos de diferentes tamanhos, isento de misturas mecânicas contaminantes ( partes de abelhas, folhas, terra, etc), com coloração verde escura, avermelhada, marrom ou preta.
• Aroma e sabor: O aroma pode ser característico, resinoso ou aromático e sabor geralmente forte e amargo ou picante (SP e MG).
• Consistência: Maleável e ligeiramente rígida em temperaturas entre 20 e 40ºC e rígida em temperatura abaixo de 20ºC.

 Análise Físico-Química:

 Preparação da amostra: Coloque em almofariz de porcelana ou em moinho especial cerca de 25g da amostra e reduza a pó ou grânulos finos. Reserve (pó).

 Avaliação da amostra:

 Umidade: Partindo de 2g da amostra pulverizada, proceda conforme Farmacopéia Brasileira, 4ª edição, 1988, V.2.9.

 Determinação de Cinzas: Partindo de 2 g da amostra pulverizada, proceda conforme Farmacopéia Brasileira, 4ª edição, 1988, V.2.10.

 Massa Mecânica: Em um cartucho de celulose para Soxhlet, pese cerca de 3,5g (P₁) da amostra pulverizada, proteja o material pesado com um chumaço de algodão e transfira o cartucho para o extrator Soxhlet. Proceda a extração por 4-6 horas, utilizando 90 ml de etanol a 96% em balão de fundo chato de 250 ml e controle a temperatura para que se obtenha 8 a 12 ciclos por hora.
 Transfira o extrato ainda quente para um bequer de 250 ml, lave o balão com duas porções de 5 ml de etanol 96% à quente e junte-as no bequer (reserve).

 Seque o cartucho em estufa a 105ºC, por 2 horas.

 Remova o resíduo para um vidro de relógio e pese-o (P₂).
 Cálculo:

                  P₂ x 100
 % MM =  ------------
                       P₁
 
 Onde: P₁ = peso inicial da amostra (g) P₂ = peso do resíduo do cartucho (g)

 Cera (substância gordurosa): Refrigere em freezer por 1 noite o extrato obtido em extrator Soxhlet e filtre- o, a frio, por papel de filtro nº 3, seco a 50ºC e tarado, recolhendo o filtrado em balão volumétrico de 100 ml. Lave o bequer e o papel de filtro com 3 porções de 5 ml de etanol 96% gelado e complete o volume. Reserve(extrato). Deixe secar o papel de filtro, à temperatura ambiente, por uma noite. Em seguida, submeta-o à secagem em estufa a 50ºC, por 10 minutos. Deixe esfriar em dessecador, por 10 minutos e pese-o (P₄).
 Cálculo:

                 (P₄ – P₃) x 100
 % Cera = -------------------
                          P₁

 Onde: P₁ = peso inicial da amostra (g)

 P₃ = peso do papel (g)

 P₄ = peso do papel + cera (g)

 Determinação de solúveis em etanol: Em vidro de relógio, previamente seco e tarado (P₅), pese rapidamente cerca de 3,0 g do extrato (P₆), com o auxílio de uma pipeta. Seque em estufa à temperatura de 100 a 105ºC, por 60 minutos. Transfira-o para o dessecador e deixe esfriar por 15 minutos e pese (P₇). Retorne o vidro de relógio para a estufa por mais 15 minutos. Repita as operações até peso constante (P₇).

 Cálculo:
 
              (P₇ – P₅) x 1000 x d
mg/ml =  -------------------------
                       (P_{6 –} P₅)

 Onde: P₇ = cápsula + resíduo (g)

 P_{6 =} cápsula + amostra inicial (g)

 d = densidade

                 a x 10
 % m/m = ---------
                   P₁

 Onde: a = mg/ml

 P₁ = peso inicial da amostra (g)

 
Propriedade Antioxidante

Em um bequer de 100 ml, pipete 2 ml do extrato e adicione 48 ml de água destilada e agite com bastão de vidro. Em um tubo de ensaio de 15 ml, previamente lavado com solução sulfocrônica e seco, pipete 0,5 ml do diluído, 0,5 ml de água destilada, l ml de ácido sulfúrico 20%, misture bem e resfrie em banho de gelo a 18ºC-20ºC. Em seguida, com auxílio de uma micropipeta, acrescente 50 ml de KMnO₄ 0,1 N e ligue o cronômetro, observando o desaparecimento da cor vermelha contra um fundo branco. Anote o tempo decorrido. Faça o teste em duplicata. Anote o valor médio encontrado, desprezando a fração quando houver.

 Identificação dos Grupos Fenólicos (Acetato de Chumbo a 10 %)

 Pipete 2,5 ml do extrato para uma proveta graduada de 10 ml e adicione 7,0 ml de etanol 96% e 0,5 ml de acetato de chumbo a 10%. Agite bem e deixe em repouso por 24 horas. Observe o precipitado formado.

 Identificação dos grupos flavonóides por espectro de absorção no UV:

 Dilua extrato na proporção 1:1000, com etanol 96%.

 Encha uma cubeta de quartzo de 10 mm com o extrato diluído e proceda à determinação do espectro de absorção com espectrofotômetro UV. O extrato deverá apresentar um ou mais picos 250 mm a 350 mm.

Flavonóides Totais:

 Padrão: prepare um padrão de quercetina 0,2 mg/ml em metanol e pipete 1 ml deste padrão para balão volumétrico de 25 ml, acrescente 15 ml de metanol e 0.5 ml de AICI₃ 5% p/v em metanol e complete o volume com metanol. Agite e deixe repousar sob abrigo da luz por 30 minutos.

 Amostra: Em balões volumétricos de 25 ml, identificados com A e B, pipete respectivamente 0,3 e 0,4 ml (V) do extrato, acrescente 15 ml de metanol p.a. Agite e deixe repousar, sob abrigo da luz, por 30 minutos. Faça a leitura das amostras e padrão em espectrofotômetro em 425 mm, usando metanol p.a. como branco.

 Cálculo:

                AA x mp
mg/ml =  ---------------
                AP x V

 Onde: AA = absorbância da amostra

 AP = absorbância do padrão

 V = volume da amostra (ml)

 mp = massa do padrão em mg (0,2)

 
            mg/ml x 100
mg/g = ----------------
                  P₁

 Onde: P₁ = peso inicial da amostra (g)

 % m/m = mg/g